實時熒光定量PCR儀是分子生物學中一種強大的工具,其用于定量檢測特定DNA或RNA分子的擴增過程的技術。實時熒光定量PCR儀則是執行這一技術的平臺,它通過增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統,實現了對PCR擴增過程的實時監控。在擴增時,引物利用同位素或熒光素進行標記,與熒光探針和模板特異性結合進行擴增。擴增信號通過實時采集系統輸送到計算機進行分析處理,最終得出量化的實時結果。
實時熒光定量PCR儀的保養需從日常清潔、操作規范、環境管理、定期維護及預防污染五個方面入手,具體方法如下:
一、日常清潔與保養
儀器表面清潔
定期用軟布蘸取少量清水擦拭儀器表面,清洗后擦干。
若試劑泄漏,需用70%酒精擦拭干凈,避免腐蝕性液體接觸儀器。
注意:清潔前必須關閉電源并拔掉電源線,禁止使用強腐蝕性或有機溶劑。
反應孔(樣品孔)清潔
灰塵或雜質會影響PCR擴增和熒光檢測,需每3個月清潔一次。
方法:用吹氣球或洗耳球輕輕吹拭孔內灰塵;若孔內有熒光物質污染,可用移液槍吸取90%酒精浸泡20分鐘,吸出酒精后自然風干或電吹風吹干。
防護:不使用時關閉滑蓋,防止灰塵進入。
熱蓋清潔
熱蓋需用酒精或純水定期擦拭,確保溫控性能良好,避免影響反應溫度均勻性。
二、操作規范與注意事項
開關機頻率
避免頻繁開關儀器,兩次開關間隔時間不低于30秒。
實驗結束后,保持待機狀態10分鐘(內部風扇持續工作),待模塊溫度降至室溫后再關閉電源,防止熱應力損傷。
電源與連接
使用原廠商提供的電源線和通訊線,避免與其他大功率設備共用插座,防止電壓波動影響運行。
建議通過穩壓器和UPS(不間斷電源)連接電源,保護電路并確保試驗結果穩定。
耗材使用
選用熱密封性好的PCR管,避免側壁和管蓋帶有記號筆標記(如需標記,僅限8聯管兩端),防止熒光信號干擾。
實驗結束后及時取出PCR管,避免溫度下降導致管蓋冷縮,氣溶膠溢出污染儀器。
三、環境管理
溫濕度控制
環境溫度建議18℃-35℃,濕度0-85%。溫度過低可能導致檢測無效(如0℃以下時陽性對照陰性)。
避免儀器暴露于潮濕、高溫或腐蝕性氣體環境中。
防塵與防干擾
儀器應放置在灰塵較少、遠離水源和熱源的地方,無強磁場干擾。
多臺儀器同時使用時,保持間距≥50cm,降低相互影響。
四、定期維護與校準
軟件更新與校準
定期檢查制造商網站,下載并安裝最新軟件版本,修復漏洞并提升性能。
根據儀器型號,每半年至一年進行一次熒光校正(如ABI品牌儀器),確保數據準確性。
溫控系統檢查
定期驗證溫度控制的準確性和穩定性,若發現溫度偏差(如各孔平均溫度差>1-2℃),需聯系專業人員調整或維修。
濾芯更換
根據使用頻率,定期更換空氣濾芯,防止灰塵進入儀器內部,延長電子元件壽命。